PCR fungidziro yekugadzirisa dambudziko: mibvunzo inowanzo bvunzwa uye mhinduro

Polymerase Chairs Comedza Nekudaro, kunge chero chishandiso chakaoma, prcr quating inogona kusangana nematambudziko anokanganisa kuita kwayo. Ichi chinyorwa chinotaura nezvimwe mibvunzo yakajairika nezvePCR ongororaKugadzirisa matambudziko uye kunopa mhinduro dzinoshanda kumatambudziko anowanzoitika.

1. Nei prr yangu isingaitwe nekuwedzera?

Imwe yezvinetso zvakajairika kutarisana nevashandisi ndiko kusakwanisa kwePrcr maitiro ekukudziridza iyo inotarisirwa DNA. Izvi zvinogona kuverengerwa kune zvinoverengeka zvinhu:

Isiriyo Primer Dhizaini: Ita shuwa kuti prever yako yakananga kune iyo inotarisirwa kutevedzana uye kuve neyakaganhurisa tembiricha (TM). Shandisa software zvishandiso zvekugadzira primer dhizaini kudzivirira nonspecific inosunga.

Issquient template DNE: View kuti uri kushandisa huwandu hwakakwana hweTemplate DNA. Zvishoma zvishoma zvichaguma nekushaya simba kana kusava nekumhanyisa.

Inhibitors mumuenzaniso: zvinosvibisa mumuenzaniso unogona kudzivirira iyo pccr maitiro. Funga nezve kuchenesa yako DNA kana kushandisa nzira yakasarudzika yekubvisa.

Solution: Tarisa yako yekutanga dhizaini, wedzera template kusungwa, uye ita shuwa yako sampuro haina inhibitors.

2. Nei yangu prcr chigadzirwa saizi isiriyo?

Kana yako PRR chigadzirwa saizi isiri inotarisirwa, inogona kuratidza dambudziko nemamiriro ekuita kana zvinhu zvinoshandiswa.

Isiri-yakatarwa kukwidziridzwa: Izvi zvinogona kuitika kana primer ichisunga saiti isina kugadziriswa. Tarisa uone chokwadi chevaridzi vachishandisa chishandiso chakadai sekuputika.

Isiriyo isiriyo yekudzora tembiricha: kana iyo yekudziya tembiricha yakaderera, isiri-chaiyo yekusunga inogona kuitika. Optimization yekudzora tembiricha neGradient PCR.

Solution: Simbisa Primer Rondedzero uye Optimize Annealation tembiricha kuti uvandudze chokwadi chePRR zvigadzirwa.

3. Yangu PCR ongorora inoratidza meseji yekukanganisa. ndoita sei?

Meseji yekukanganisa pane PRR ongorora inogona kutyisa, asi kazhinji dzinogona kupa zviratidzo kune zvinogona kuitika matambudziko.

Nyaya dzeCalibration: Ita shuwa iyo PRR ongorora inozivikanwa nenzira kwayo. Kugara kuchengetedzwa uye cheki cheki zvakashora kuti uwane mhedzisiro chaiyo.

Software boka: Dzimwe nguva, software bugs inogona kukonzera matambudziko. Restart komputa yako uye tarisa kune software yekugadzirisa.

Solution: Taura kune mushandisi bhuku kune chaiyo yekukanganisa kodhi uye tevera iyo yakakurudzirwa kugadzirisa matanho ekugadzirisa matambudziko. Kugara kuchengetedzwa kunogona kudzivirira matambudziko mazhinji.

4. Nei nguva yangu yePR maitiro inoguma isingaenderane?

Asingapolenclent PCR Mhedzisiro inogona kushungurudza nekuda kwezvikonzero zvakati:

Ratidza mhando: Ita shuwa kuti vese reagents, kusanganisira enzymes, buffers, uye dntps, mutsva uye wemhando yepamusoro uye yemhando yepamusoro. Dzakapera kana dzakasvibiswa reagents dzinogona kukonzera kusiyanisa.

Thermal cyler calibration: zvisingapindirani tembiricha zvigadziriso zvinogona kukanganisa prcr maitiro. Gara uchiongorora calibration yeiyo yekudyira yeTyrmal.

Solution: Shandisa yakakwirira-mhando reagents uye calibrate yako yekudyara cyrycler nguva dzose kuti ive nechokwadi chekuenderana.

5. Maitiro Ekugadzirisa PRC Reaction Kubudirira?

Kuvandudza kushanda kwePCR maitiro kunogona kutungamira kune yakakwirira goho uye zvakavimbika mhedzisiro.

Optimize maitiro ekuita: kuyedza uchishandisa akasiyana ongororo yePrimers, template DNA uye MGCL2. Imwe neimwe prcr maitiro ingangoda mamiriro akasarudzika ekuita kwakakwana.

Shandisa yakakwirira-kuvimbika enzymes: kana kururamisa kuchikosha, funga nezvekushandisa yakakwirira-fidelity DNA polymerase kuderedza zvikanganiso panguva yekuwedzera.

Solution: ita gadziriso yekuedza yekutsvaga kuti uwane iyo yakanakisa mamiriro kune yako chaiyo PCR setup.

Mukupfupikisa

Kugadzirisa dambudziko aPCR ongororaInogona kuve basa rinotyisa, asi kunzwisisa matambudziko akajairika uye mhinduro dzadzo dzinogona kusimudzira zvakanyanya pane yako prcr ruzivo. Nekugadzirisa izvi zvinetso zvakajairika, vaongorori vanogona kugadzirisa pcr migumisiro uye vave nechokwadi chakavimbika mumoyo manyorerwo ebiology application. Kugara kuchengetedzwa, kusarudzwa kwekungwarira kweReagents, uye optimization yemamiriro ezvinhu emakiyi ekiyi ekubudirira PRR ongororo.